1. 测量之前需要特别注意的事项
(1)在切换光源、修改设置或放样品之前必须把狭缝(Δλ)关到最小(0.01nm),否则会损坏光电倍增管!如果打开样品室盖子之后,Em1的SignalRate增加,请停止实验并立即与工作人员联系!
(2)用PMT检测时,必须等稳压电源CO1的温度示数在-17℃以下才可以开始采集数据;
(3)严禁用稳态瞬态荧光光谱仪测量未知样品紫外可见区的稳态光谱!
(4)狭缝范围0.01~18nm,调节时注意不要超过上限。
(5)每次设置完参数后都点击Apply或者回车键确定。
(6)如实填写仪器使用记录,爱护仪器。
2.开机
(1)先打开电脑,再打开PH1供电,打开CO1冷却,需要给red-PMT(常规检测器)降温到-20℃。
(2)打开灯箱后面的电源开关,当面板上显示“readyto start”后,然后按下面板旁边的点灯按钮。氙灯点亮。一般需要预热20min左右。
(3)打开软件Fluoracle软件。初始化后,软件跳出Signalrate对话框,可以开始操作了。
3.信号调节
(1)在signalrate界面调节样品信号。
(2)打开样品室的盖子,放入待测样品,然后盖好。
(3)在sourceof light path中选择光源,detector of light path中选择检测器,选完后,将Ex和Em的bandwidth(也就是狭缝)调到最小,一般为0或者0.01,点击Apply。
(4)输入对应的Ex和Em波长,调节Ex和Em狭缝,将Emission的信号调到合适值。
(5)固体样品,需要调节样品槽位置,调节信号强弱。
(6)Reference为参比检测器的信号值,一般不能超过4,000,000。
3. 测试光谱
(1)signalrate中选择Xe Lamp,检测器选择red-PMT (200~900nm)或者NIRPMT(600~1700nm)。
(2)输入波长,调试狭缝,Emission信号不能超过1,000,000cps。
(3)关闭signalrate,点击“λ”,选择测试方法。
(4)Emissionscan,Correction,校正文件,建议勾选“Excitation correction”,以扣除激发光源的波动;“Emission correction file”,勾上后,扫描的谱图自动扣除校正文件;也可以不勾选,在数据处理时再加载上校正文件。
(5)Scan___from____,设置波长起始;step设置步径,一般为0.5、1nm,越大扫描越快;dwell time,积分时间,一般设置0.1~0.5s,越大峰值越高;number of scans,扫描次数,最终的谱图是多次扫描的叠加。
(6)设置完成后,点击start,开始测试。
(7)加载校正文件:在Analysis中的correction中,选择需要加载的校正文件。
(8)数据可以保存为原始文件、csv、ASC Ⅱ文件和图片文件。
4. 关机。关电源:氙灯,先关掉灯;等散热完全,再关掉氙灯电源;关掉软件,关掉CO1和PH1。
5. 注意事项
(1)在环境湿度大于70%,温度高于30度时,保持空调或除湿机常开;
(2)保持实验室安静和整洁,不得在实验室内进行样品化学处理,实验完毕即取出样品室内的样品。
(3)样品室窗门应轻开轻关,避免仪器振动受损。
(4)每次使用前记录仪器必须做好登记。
(5)离开实验室前,须注意关灯,关空调,最后拉开总闸刀。